- 嘌呤霉素鹽酸鹽（抗生素）
- 型號(hào)：FS0020
- 報(bào)價(jià)：540
- 地區(qū)：上海市
- 嘌呤霉素鹽酸鹽（抗生素）嘌呤霉素（puromycin;PM ） 是一種蛋白質(zhì)合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結(jié)構(gòu)，能夠同氨基酸結(jié)合，代替氨酰化的tRNA同核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合，并摻入到生長(zhǎng)的肽鏈中。雖然嘌呤霉素能夠同A位點(diǎn)結(jié)合，但是不能參與隨后的任何反應(yīng)， 因而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。
- 021-34600120
嘌呤霉素鹽酸鹽（抗生素）
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 報(bào)價(jià)（元） |
| FS0020 | Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素鹽酸鹽(抗生素） | 25mg | 540.00 |
| FS0020 | Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素鹽酸鹽（抗生素） | 100mg | 1800.00 |
| FS0020 | Puromycin Dihydrochloride | 500mg | 8500.00 |
產(chǎn)品應(yīng)用：
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽(yáng)性菌及各類動(dòng)物和昆蟲細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。其作用機(jī)制：嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。同A位點(diǎn)結(jié)合后，不會(huì)參與隨后的任何反應(yīng)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（PAC），賦予機(jī)體對(duì)嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。嘌呤霉素在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān)，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來(lái)篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
產(chǎn)品屬性：
CAS號(hào)（CAS NO.）：58-58-2
分子式（Formula）：C22H29N7O5·2HCl
分子量（Molecular weight）：544.43
純度（Purity, HPLC）：＞98%
外觀（Appearance）：白色至米白色粉末
化學(xué)結(jié)構(gòu)式（Structure）：
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃干燥保存，1年有效；為了維持產(chǎn)品穩(wěn)定性，建議-20℃干燥保存，2年有效。
使用方法
1. 建議使用濃度
哺乳動(dòng)物細(xì)胞：1-10μg/mL，濃度需要?dú)缜€來(lái)確定。
大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。
注：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要精確的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細(xì)胞本身的影響。
2. 溶解方法
用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50mg/mL母液，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌后分裝，-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10mg/mL儲(chǔ)存液。
3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定（以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例）
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的zui低濃度嘌呤霉素至關(guān)重要。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶一定要建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺死曲線（kill curve）。
1） Day 1：24孔板內(nèi)以5~8 × 104 cells/孔的密度鋪板，鋪?zhàn)銐蛄康目滓赃M(jìn)行后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃細(xì)胞孵育過(guò)夜。
2） Day 2：a）準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基（如0-15μg/mL，至少5個(gè)梯度）；b）往孵育過(guò)夜后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基；之后37℃孵育細(xì)胞。
3） Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細(xì)胞存活率。
4） 根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基。
5） 每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞，觀察存活細(xì)胞率，從而確定抗生素篩選開(kāi)始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物zui低濃度。
4. 哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選
等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后，細(xì)胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
1） 細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，將細(xì)胞（原樣或稀釋）置于含有適當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
注：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用zui明顯。細(xì)胞過(guò)于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降。這時(shí)進(jìn)行細(xì)胞分盤使其密度不超過(guò)25%。
2） 每隔2-3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
3） 篩選7天后評(píng)估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間，這依賴于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。
注：每日進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
4） 轉(zhuǎn)移和放置5-10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
注意事項(xiàng)
1） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2） 嘌呤霉素為有毒化合物，操作時(shí)請(qǐng)小心拿放。
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