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技術文章首頁 > 技術文章 詳細分析組織細胞固定液的使用方法及注意事項
  • 詳細分析組織細胞固定液的使用方法及注意事項
  • 點擊次數:14037 更新時間:2019-05-17
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  •   組織細胞固定液的作用:
      組織經一系列的處理后,就必須進行固定,當然有的組織是先固定,再進行處理,然后再固定。固定的作用,從組織學的角度其簡單的定義是,保持細胞、組織的固有形態和結構,使之盡量保持細胞、組織的固有形態和結構,而從免疫組化技術的角度,固定的作用不僅是使細胞內蛋白質凝固,盡量減少或終止外源性酶和內源性酶的反應;防止細胞的自溶,以免使抗原擴散至組織間質;以保持組織的固有形態和結構;更重要的是保持組織或細胞的抗原性,不但要使抗原不導致失活,而且不使抗原發生彌散的現象,才能在免疫組化染色時,不產生過深的背景,影響對陽性物的判斷。
     
      組織細胞固定液的使用說明:
      1、對于細胞樣品,去除培養液后,按照每六孔板一個孔加入 1 毫升固定液的比例,加入 4%多聚甲醛固定液。對于細胞涂片等其它細胞樣品,加入固定液的量以充分蓋住樣品為準。通常室溫固定 10-20 分鐘即可,但固定較長時間,例如 1-2 小時也是可以的。后續需使用適當的洗滌液充分洗滌以去除殘留的多聚甲醛。
      2、對組織切片,加入 4%多聚甲醛固定液量以充分覆蓋切片為準,或使用染色架進行固定。通常室溫固定 10-20 分鐘即可完成固定,但切片較厚時可以固定較長時間,例如 1-2 小時。后續需使用適當的洗滌液充分洗滌以去除殘留的多聚甲醛。
      3、對于組織塊樣品,浸泡入 4%多聚甲醛固定液中,室溫或 4℃浸泡固定 2-24 小時。建議不超過 8 小時,除非組織塊特別大,難以滲透。固定完成后,放入裝有蒸餾水的離心管中清洗,每 15-30 分鐘換一次,共 6-8 次,建議在搖床進行,或用流水沖洗 1-2 小時。隨后梯度脫水,進行包埋。如果暫時不包埋可放入 70-75%的酒精中保存。
     

      組織細胞固定液的注意事項:
      1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。
      2、多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
      3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙。分子間交聯形成的網格結構可能部分或 *掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果。因此,4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續操作。
      4、本產品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
      5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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